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PCR-Reagenzien

PCR-Reagenzien

Es gibt eine Reihe von PCR-Reagenzien, darunter Primer und DNA-Template. Die folgende Liste enthält eine Vielzahl dieser Komponenten und ihre entsprechende Verwendung. Die Glühtemperatur und die Mg2+-Konzentration sind die häufigsten Änderungen, während andere Parameter nicht betroffen sind. Die Denaturierungstemperatur sollte zwischen 97 und 50 °C liegen, und die Amplifikationszeit sollte mindestens eine Minute betragen.

Taq-DNA-Polymerase wird typischerweise in 50 % Glycerollösung gelagert. Nach der Verdünnung im PCR-Reaktionsgemisch die beiden Reagenzien 20 Mal vorsichtig mischen. Anschließend dünnwandige 0,2-ml-PCR-Röhrchen mit dem Mastermix füllen und in den Thermocycler stellen. Sobald die Reaktion abgeschlossen ist, schließen Sie den Deckel, um das Programm zu starten. Die Temperatur wird bei 37 °C gehalten, um jegliche Kontamination zu verhindern.

PCR-Reagenzien sind formuliert, um die Effizienz der Amplifikation zu maximieren. RNA-Polymerase und DNA-Polymerase sind wesentliche Akteure bei der Replikation von Ziel-DNA. Die Taq-DNA-Polymerase ist das bekannteste PCR-Enzym und wurde 1980 entdeckt. Sie hat eine ausgezeichnete Thermostabilität, baut Nukleotide mit 60 Basen pro Sekunde bei 70 °C ein und ist für Standard-PCR ohne besondere Anforderungen geeignet. Neue Generationen von DNA-Polymerasen wurden jedoch entwickelt, um ihre Leistung und Stabilität zu verbessern.

PCR-Primer und DNA-Template sind für eine erfolgreiche Amplifikation unerlässlich. Das DNA-Template muss in einer Konzentration verwendet werden, die seine Wirksamkeit maximiert und jedes mögliche Kontaminationsrisiko minimiert. Die PCR-Reagenzien sollten nicht mehr als 1,5 mM jeder Reprobe enthalten. Für optimale Ergebnisse muss die Amplifikation bei einer Konzentration von zwei bis vier mM durchgeführt werden.

Während Nordamerika in naher Zukunft weiterhin den PCR-Markt dominieren wird, wird er durch andere Regionen begrenzt. Die zunehmende Prävalenz genetischer Erkrankungen sowie eine gut entwickelte Gesundheitsinfrastruktur sind die Hauptfaktoren, die das Wachstum in dieser Region vorantreiben werden. Die zur Durchführung einer PCR verwendeten Reagenzien sind oft sehr teuer und müssen mit Vorsicht gekauft werden. Sie können ernsthafte gesundheitliche Probleme verursachen. Trotz der Risiken sind PCR-Reagenzien in der klinischen Praxis weit verbreitet.

Trotz der hohen Kosten von PCR-Reagenzien macht der Preis eines Reagenz nur einen kleinen Teil seines Gesamtpreises aus. In einigen Fällen können die Kosten für ein Reagenz recht hoch sein, daher ist es am besten, Reagenzien zu einem niedrigen Preis zu kaufen. Damit ein Labor bei den Kosten eines PCR-Kits Geld sparen kann, wird jeden Tag eine Neuprobe verwendet.

PCR-Reagenzien sind die gebräuchlichste Art, PCR durchzuführen. Neben den PCR-Reagenzien gibt es auch eine Reihe spezialisierter Reagenzien, die zur Durchführung einer PCR verwendet werden. Beispielsweise sind die bei der Amplifikation verwendeten Enzyme darauf ausgelegt, die Ausbeute und Spezifität des Tests zu erhöhen. Die Enzyme sind außerdem empfindlicher und schneller ausgelegt, was sie für die Diagnostik im Labor nützlich macht.

PCR-Reagenzien können mit anderen Reagenzien kontaminiert sein. Es wird empfohlen, die Reagenzien des PCR-Amplifikationskits vor der Verwendung auf Kontamination zu testen. Ein CDC-Labortestkit enthält eine menschliche Zellkulturpräparation als Verfahrenskontrolle. Die Gebrauchsanweisung für die PCR-Reagenzien sollte auch eine nukleasefreie Wasserlösung enthalten, um die Qualität des Reagenz zu überwachen.

Ein PCR-Gerät ist für ein erfolgreiches Experiment unerlässlich. PCR-Reagenzien sind für eine erfolgreiche PCR-Reaktion erforderlich. Beispielsweise ist eine 96-Well-Platte ein nützliches Werkzeug, um die dNTPs in einer Probe zu überprüfen. Die CDC hat auch ihre eigenen Designspezifikationen für Primer und Sondensequenzen für den PCR-Test geteilt. Darüber hinaus erfordert das CDC-Labortestkit die Verwendung einer menschlichen Zellkulturpräparation als Verfahrenskontrolle.

Ein PCR-Primer ist ein Molekül, das die zu amplifizierende Zielregion definiert. Ein PCR-Primer ist im Allgemeinen 15–30 Basen lang und sollte einen GC-Gehalt von 40–60 % haben. Ein guter PCR-Primer wird keine intermolekularen komplementären Sequenzen haben. Ein richtig passender PCR-Primer ist für eine erfolgreiche Klonierung unerlässlich. Das resultierende Produkt ist nicht identisch mit der Vorlage.

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cd